No seguinte link:
encontrará uma folha de cálculo com dados de curvas de progresso para um dado, representando a variação da concentração do produto ao longo do tempo,para várias concentração do substrato. Tal como no exercício da aula 1, pretende-se estimar os parâmetros cinéticos do enzima, determinando primeiro as velocidades iniciais para cada concentração e, em seguida, estimand os parâmetros cinéticos do enizma com base na dependência da velocidade inicial com a concentração de substrato. No entanto neste caso será comparado o método "empírico" de determinação das velocidades iniciais (com base na estimação das tangentes), com o método mais rigoroso baseado na forma integrada da equação de Michaelis-Menten: \[ V_{max}^{app} \; t = [P] + K_{m}^{app} \; {\ln \left[ {[A]_0/([A]_0-[P])} \right]} \] note-se que as grandezas \(V_{max}^{app}\) e \(K_{m}^{app} \) diferem, em gera, de Km e Vmax, só sendo numericamente iguais a estes para o caso em que a deplecção do substrato é o único factor a afectar a curva de progresso. Inpendentemente da forma matemática exacta destas grandezas aparentes, verifica-se a seguinte relação: \[ v_i = {V_{max}^{app}\: [A]_0 \over K_{m}^{app} + [A]_0} \] e, conhecidos os parâmetros \(V_{max}^{app}\) e \(K_{m}^{app} \) para cada \([A]_0\), podemos determinar a velocidade inicial correspondente.
A determinação dos parâmetros \(V_{max}^{app}\) e \(K_{m}^{app} \) pode ser feita recorrendo à seguinte linearização da forma integrada da equação de Michaelis-Menten:
\[ \frac{t}{\ln \left[ {[A]_0/([A]_0-[P])} \right]} = \frac{1}{V_{max}^{app}} \frac{[P]}{\ln \left[ {[A]_0/([A]_0-[P])} \right]} + \frac{K_{m}^{app}}{V_{max}^{app}} \] produzindo gráficos deste tipo para cada concentração \([A]_0\) de substrato, poderemos obter as velocidades iniciais.
Objectivo: estimar os valores de velocidade inicial a partir das curvas de progresso, primeiro pelo método "empírico" do trabalho anterior e seguidamente usando o método mais rigoroso acima descrito. A partir das velocidades iniciais determinar os valores de \(K_m\) e \(V_{max}\) para este ensaio.